采用雙宿主菌提升大腸桿菌噬菌體RDP-EC-20164發(fā)酵性能的方法
噬菌體作為替抗產(chǎn)品，生產(chǎn)發(fā)酵工藝已越發(fā)成熟。部分噬菌體發(fā)酵性能一般、無法實現(xiàn)高密度發(fā)酵，可通過調(diào)整感染復數(shù)、改變培養(yǎng)條件、更換宿主菌等方法提升發(fā)酵液的效價。但使用這些方法效果是有限的，一般當噬菌體發(fā)酵到某一數(shù)量級，由于噬菌體自身機制，噬菌體發(fā)酵液的效價便不再提升，通過這些方法一般僅能提升1個數(shù)量級,故一些本身效價低的噬菌體仍無法通過發(fā)酵生產(chǎn)達到令人滿意的效價。現(xiàn)有技術中單一宿主的噬菌體發(fā)酵液效價一般在105-107pfu/mL，在實際應用中受一定的限制，制備的相關藥物效果受限。
為克服相關技術中存在的問題，下面提供一種采用雙宿主菌提升噬菌體發(fā)酵性能的方法，該方法根據(jù)獲取的噬菌體一步生長曲線選取第二宿主BE-20096的添加時間；第一宿主BE-20261與噬菌體按照相同比例加入肉湯中培養(yǎng)后，添加第二宿主，并進一步發(fā)酵添加第二宿主的噬菌體混合發(fā)酵液；具體包括以下步驟：
以大腸桿菌噬菌體RDP-EC-20164為具體實施對象，根據(jù)噬菌體RDP-EC-20164一步生長曲線選取適當時間(0.5h)添加第二宿主。噬菌體的第一宿主與噬菌體按照相同比例加入肉湯中，37℃發(fā)酵0.5h后，添加第二宿主，發(fā)酵4-6h。如此，使用雙宿主菌共同發(fā)酵來提升噬菌體發(fā)酵性能。
具體的，采用雙宿主菌提升噬菌體發(fā)酵性能的方法具體包括以下步驟：
S1，根據(jù)裂解譜實驗篩出被RDP-EC-20164裂解的多株大腸桿菌；基于篩出的多株大腸桿菌，通過成斑實驗篩出多株大腸桿菌作為備選宿主菌，備選宿主菌為第二宿主；
S2，將第一宿主和噬菌體液RDP-EC-20164相同體積接種量加入LB肉湯中培養(yǎng)，獲取噬菌體RDP-EC-20164一步生長曲線；
S3，基于步驟S2獲取的噬菌體RDP-EC-20164一步生長曲線，添加第二宿主，繼續(xù)發(fā)酵，測定混合發(fā)酵液效價，以及進行統(tǒng)計分析。
大腸桿菌噬菌體RDP-EC-20164，透過電鏡觀察該噬菌體為肌尾病毒，頭部長度約為118.8nm，尾部長度為122.4nm，基因組全長為48591，基因序列為SEQ ID NO：1，保藏編號為CGMCC No.45369。
根據(jù)噬菌體RDP-EC-20164一步生長曲線選取適當時間添加第二宿主。噬菌體的第一宿主與噬菌體按照相同比例加入肉湯中，發(fā)酵適當時間后，添加第二宿主，發(fā)酵4-6h。使用雙宿主菌共同發(fā)酵可以提升發(fā)酵性能。
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