不同質量濃度水飛薊賓對6種標準菌株的生長抑制曲線（二）
3、結果
3.1水飛薊賓及同分異構體對標準菌株的MIC
結果見表1。水飛薊賓對革蘭陽性菌標準菌株的MIC為50～400μg/mL，對表皮葡萄球菌表現出最強的抑菌活性，MIC值為50μg/mL。水飛薊賓對革蘭陰性菌標準菌株的抑菌效果明顯低于革蘭陽性菌，MIC值＞400μg/mL；在水飛薊賓的同分異構體中，僅異水飛薊賓表現出對表皮葡萄球菌、屎腸球菌和糞腸球菌標準菌株有一定的抑菌活性（MIC為400μg/mL）。水飛薊賓的抑菌活性明顯高于其同分異構體。
3.2水飛薊賓對臨床分離菌株的MIC
結果見表2。水飛薊賓對表皮葡萄球菌臨床分離菌株的MIC值分布為＞400、400、200、100μg/mL，對應菌株占比分別為20.0%、40.0%、20.0%、20.0%；對金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌臨床分離菌株的MIC值分布為＞400、400μg/mL；對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌臨床分離菌株的MIC值均＞400μg/mL。表皮葡萄球菌的MIC值分布與其他測試菌種比較，差異顯著（P＜0.05）。
3.3抗生素對標準菌株和臨床分離菌株的MIC
結果見表3和4。臨床常用抗生素對標準菌株的MIC值符合CLSI對非苛養菌的MIC質量控制允許范圍。
3.4水飛薊賓對標準菌株的生長抑制曲線檢測結果
結果見圖1。對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌，培養液中水飛薊賓濃度為0.5 MIC時菌體繁殖速度減慢；當藥物濃度為1 MIC或2 MIC時菌體繁殖速度受到明顯抑制，在培養的16 h內菌體濃度與初始濃度相比基本無變化。大腸埃希菌和銅綠假單胞菌生長曲線不受水飛薊賓影響，在培養的16 h內與對照組的菌體數量及繁殖速度基本一致。
3.5水飛薊賓與臨床常用抗生素對標準菌株的聯合抑菌效應
FIC值結果見表5。水飛薊賓與青霉素聯合，對表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌有相加作用，對屎腸球菌和糞腸球菌是無關作用。水飛薊賓與紅霉素聯合，對表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌分別為協同和相加作用，對屎腸球菌和糞腸球菌是無關作用。水飛薊賓與環丙沙星聯合，對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌均為拮抗作用。水飛薊賓與慶大霉素聯合，對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌均為無關作用。
3.6水飛薊賓與臨床常用抗生素對臨床分離菌株的聯合抑菌效應
FIC值結果見表6和7。水飛薊賓與青霉素聯合，對表皮葡萄球菌和糞腸球菌的FIC值分布差異顯著（P＜0.01），對表皮葡萄球菌主要是相加作用，對糞腸球菌主要是無關作用；菌種間FIC值分布的其余兩兩比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。水飛薊賓與紅霉素聯合，對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌及屎腸球菌的FIC值分布差異均無統計學意義（P＞0.05）。水飛薊賓與環丙沙星聯合，對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的FIC值分布差異均無統計學意義（P＞0.05）；水飛薊賓與慶大霉素聯合，對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的FIC值分布差異均無統計學意義（P＞0.05）。
水飛薊賓與青霉素聯合對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌和糞腸球菌的FIC值分布，與水飛薊賓與紅霉素聯合對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌和糞腸球菌的FIC值分布比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。水飛薊賓與環丙沙星聯合對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的FIC值分布，與水飛薊賓與慶大霉素聯合對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的FIC值分布比較，差異顯著（P＜0.05），水飛薊賓與環丙沙星聯合對這2種細菌的聯合抑菌效應均以拮抗為主，水飛薊賓與慶大霉素聯合對這2種細菌的聯合抑菌效應均以無關為主。
4、討論
抗生素濫用在醫療、食品安全、動物養殖和環境等方面引起的問題日趨嚴重。尋找并應用其他抗菌物質控制耐藥性細菌或用于食品防腐逐漸引起關注。從天然植物中尋找抗菌資源，篩選抗菌藥物越來越受到國內外學者的重視[16]。近年來水飛薊素的抗菌活性逐漸引起了人們的關注[17-21]，但大多數研究是關于水飛薊素混合物，而對單體的抑菌活性、抑菌譜及其與抗生素聯合抑菌效應報道極少。
本實驗結果顯示，水飛薊賓對臨床常見感染細菌的抑菌活性明顯高于其他同分異構體（異水飛薊賓、水飛薊亭和水飛薊寧），表明水飛薊賓為水飛薊素的主要抑菌活性成分。黃酮類化合物的抑菌活性具有構效關系，分子中的電荷密度、A環羥基化與親脂性取代基團能增強抑菌活性，分子結構中較多酚羥基，可與蛋白質、酶等以氫鍵結合而使其失去活性，從而起到抑菌的作用[6,11]。水飛薊賓對革蘭陽性試驗菌的抑菌活性顯著高于革蘭陰性試驗菌，這可能與細胞壁結構差異有關，水飛薊素（賓）可破壞革蘭陽性菌-金黃色葡萄球菌和糞腸球菌的細胞壁[12,18]。水飛薊賓對表皮葡萄球菌的抑菌活性最強，標準菌株和臨床分離菌株的MIC值分別為50μg/mL和100～400μg/mL；對金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、屎腸球菌的抑菌效果不佳，這些標準菌株和臨床分離菌株的MIC值分別為400μg/mL和≥400μg/mL。Evren等[19]報道水飛薊素對金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耐萬古霉素腸球菌和糞腸球菌的MIC值為60～120μg/mL，水飛薊賓占水飛薊素的60%～70%，據此可推出水飛薊賓對這些細菌的MIC值應低于60～120μg/mL。水飛薊賓單體對這些細菌的MIC值明顯高于水飛薊素，這可能與水飛薊素為含多種成分的混合物，存在協同抑菌作用及藥物純度有關。文獻報道[6]甘草乙醇浸膏中甘草酸和甘草渣總黃酮具有協同抑菌作用。鑒于上述結果，本實驗選用抑菌活性最好的水飛薊賓進行后續實驗。
本實驗結果顯示，水飛薊賓對多重耐藥菌的抑菌活性明顯低于敏感菌株。這與Jung等[20]的研究結果存在較大差異。與標準菌株比較，水飛薊賓對臨床分離菌株顯示較低的抑菌活性，在相同菌種臨床分離菌株間MIC也存在較大差異，這可能主要是因為菌株間存在不同耐藥機制，如細菌同時產生多種抗生素水解酶、鈍化酶、修飾酶，或存在外排泵系統，或藥物作用靶位改變等，這些都可使藥物的抑菌作用降低。
本實驗結果表明，水飛薊賓對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和屎腸球菌的生長都有明顯抑制作用，抑制效果隨藥物質量濃度的增加而增加。水飛薊賓對大腸埃希菌和銅綠假單胞菌的生長沒有抑制作用。這也驗證了水飛薊賓能抑制革蘭陽性菌生長，而對革蘭陰性菌生長無抑制作用。
臨床上中西藥聯合應用較為廣泛，中藥和化學藥聯合應用可取長補短利于疾病治療、減少耐藥菌發生、降低或減少毒副作用。聯合藥敏實驗結果表明，對革蘭陽性試驗菌，水飛薊賓與青霉素/紅霉素聯合抑菌效應以相加和無關作用為主，無協同和拮抗作用。水飛薊賓與青霉素/紅霉素聯合用藥，對青霉素/紅霉素耐藥的菌株，不能降低細菌對青霉素/紅霉素的耐藥程度和使其耐藥性逆轉；但對青霉素/紅霉素敏感的菌株，可降低青霉素/紅霉素的臨床用藥劑量，降低或減少毒副作用與不良反應。對革蘭陰性試驗菌，水飛薊賓與環丙沙星聯合抑菌效應以拮抗作用為主，無協同和相加作用。水飛薊賓與環丙沙星聯合用藥，不僅不能降低環丙沙星耐藥菌株對環丙沙星的抗藥性，反而增加其抗藥性；對環丙沙星敏感菌株，需增加環丙沙星的臨床用藥劑量，更易引起毒副作用或不良反應。水飛薊賓與慶大霉素聯合抑菌效應以無關作用為主，少數可產生拮抗作用，無協同和相加作用。水飛薊賓與慶大霉素聯合用藥，不能降低慶大霉素耐藥菌株的耐藥程度和使其耐藥性逆轉，有可能增強其抗藥性；對慶大霉素敏感菌株，不能降低慶大霉素的臨床用藥劑量，致水飛薊賓的無意義用藥。但水飛薊賓可減少慶大霉素產生的活性氧，減輕其引起的腎臟毒性。
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