制藥廢水生化處理過程中硝化菌分離篩選、生長曲線的測定（一）
在全面控制污染物排放專項整治行動中，原料藥制造行業(yè)屬于十大重點行業(yè)之一，制藥（抗生素、維生素）行業(yè)需嚴格控制其廢水污染物排放。制藥廢水因污染物質(zhì)組分復雜，氨氮含量高，且包含有生物抑制物、有毒有害物質(zhì)而難以被微生物自然降解，因此抗生素類制藥廢水的處理是一個棘手問題。在制藥廢水生化處理過程中，脫氮菌是影響生物脫氮效果的關(guān)鍵因素，發(fā)掘新型的高效脫氮菌對生物脫氮技術(shù)在廢水處理中的運用具有十分重要的意義。
1材料與方法
1.1儀器與試劑
1.1.1實驗儀器
LDZM-80KCS壓力滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠；VS-1900凈化工作臺，蘇州市金凈凈化設備科技有限公司；Applied Biosystems 2720熱循環(huán)儀，美國賽默飛世爾公司；GWA-UN4-F20超純水器，北京普析通用儀器有限公司；FR980凝膠成像儀，上海復日科技儀器有限公司；TH2-C恒溫搖床，太倉市實驗設備廠；FE28型酸度計，瑞士梅特勒-托利多公司；Applied Biosystems 3730XL測序儀，美國賽默飛世爾公司；DT5-6A離心機，北京時代北利離心機有限公司；SHH-250L生化培養(yǎng)箱，重慶康城永生試驗設備有限公司；微生物生長動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng),丹麥Biosense公司。
1.1.2試劑
NaCl、MgSO4·7H2O、Na2CO3、CaCO3和NaH2PO4，AR級，成都市科隆化學品有限公司；K2HPO4、KH2PO4、CH3COONa、(NH4)2SO4和MnSO4·H2O，AR級，西隴科學股份有限公司；FeSO4·7H2O、NH4Cl，AR級，國藥集團化學試劑有限公司；無水葡萄糖，AR級，中國惠興生化試劑有限公司。
1.2樣品與培養(yǎng)基
1.2.1樣品來源
活性污泥樣品采集自湖北省宜昌市三峽制藥有限公司生化池。使用前先用純化水進行清洗處理：用250 mL燒杯裝入一半容積的污泥，加入等體積純化水后，玻璃棒攪拌1 min，靜置沉降30 min，去除上層水洗液，重復3次后備用。同時取樣進行宏基因測序，分析目標樣品內(nèi)微生物結(jié)構(gòu)豐度。
1.2.2培養(yǎng)基
（1）富集培養(yǎng)基。富集培養(yǎng)基A：NH4Cl 0.8 g、NaNO20.5 g、KH2PO44.0 g、MgSO4·7H2O 0.4 g和Na2CO30.8 g，加水2 000 mL，pH 7.4，121℃高溫滅菌15 min。富集培養(yǎng)基B：NaNO22 g、NaCl 1 g、K2HPO41 g、MgSO4·7H2O 1 g、FeSO40.8 g和Na2CO32 g，加水2 000 mL，pH 7.8，121℃高溫滅菌15 min。
（3）硝化培養(yǎng)基培養(yǎng)基。NH4Cl 0.4 g、NaCl 0.12 g、K2HPO40.2 g、CH3COONa 2 g、MgSO40.05 g、MnSO40.01 g和FeSO40.01 g，加水1 000 mL，調(diào)節(jié)pH值7.2，添加18 g/L的瓊脂，121℃高溫滅菌15 min。
（4）反硝化培養(yǎng)基。NaNO20.05 g、NaCl 3 g、KH2PO42 g、CH3COONa 1 g、NaH2PO43 g和無水葡萄糖10 g，加水1 000 mL，調(diào)節(jié)pH值7.2，添加18 g/L的瓊脂，121℃高溫滅菌15 min。
1.3硝化菌富集培養(yǎng)及硝化菌分離
取經(jīng)過前處理的活性污泥20 mL分別加入裝有100 mL無菌富集培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中。30℃、180 r/min恒溫搖床中富集培養(yǎng)72 h；轉(zhuǎn)接后，再次富集。將富集液進行梯度稀釋（10-2～10-4）后，分別涂布于、硝化和反硝化固體培養(yǎng)基上，30℃恒溫培養(yǎng)至出現(xiàn)明顯單菌落。
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