鼠疫耶爾森氏菌在3種選擇培養(yǎng)基生長(zhǎng)能力的測(cè)定——結(jié)果、結(jié)論
2結(jié)果
2.1鼠疫菌在3種選擇培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況及特異性
檢測(cè)1號(hào)培養(yǎng)基中的鼠疫耶爾森氏菌、假結(jié)核耶爾森氏菌和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生長(zhǎng)良好，均為玫紅色菌落，鼠疫菌發(fā)育成熟，菌落中心呈淡紅色(見圖1)。金黃色葡萄球菌和鏈球菌不生長(zhǎng)，大腸埃希氏菌生長(zhǎng)受抑制，菌落計(jì)數(shù)少。變形桿菌的彌漫性生長(zhǎng)受抑制，呈單個(gè)菌落;2號(hào)培養(yǎng)基可見大腸埃希氏菌生長(zhǎng)，其它各實(shí)驗(yàn)菌株生長(zhǎng)均受抑制;鼠疫菌在龍膽紫培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，菌落稍隆起，半透明略帶藍(lán)灰色，鏡下觀察鼠疫菌菌落形態(tài)不典型，生長(zhǎng)緩慢，變形桿菌在龍膽紫培養(yǎng)基上生長(zhǎng)受抑制，呈單個(gè)菌落，大腸埃希氏菌長(zhǎng)滿整個(gè)平板。結(jié)果見表1。
圖1鼠疫菌在選擇培養(yǎng)基和赫氏培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況
表1鼠疫菌在4種培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況
2.2選擇敏感培養(yǎng)基敏感性的測(cè)定
鼠疫菌在龍膽紫培養(yǎng)基和2號(hào)培養(yǎng)基敏感性差，鼠疫EV菌液濃度為10－7時(shí)，未見鼠疫菌生長(zhǎng)，1號(hào)培養(yǎng)基在10－8時(shí)依然有菌生長(zhǎng)，其敏感性與赫氏培養(yǎng)基一致，見表2。
表2鼠疫耶爾森氏菌在各培養(yǎng)基敏感性檢測(cè)結(jié)果
2.3臟器檢驗(yàn)結(jié)果
應(yīng)用選擇培養(yǎng)基檢測(cè)腐敗材料中鼠疫菌，結(jié)果見表3。
表3選擇培養(yǎng)基檢測(cè)腐敗材料結(jié)果
3結(jié)論
鼠疫菌的分離是所有鼠疫預(yù)防和控制工作的前提和核心，對(duì)于任何從鼠疫監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)帶回的鼠疫宿主動(dòng)物或動(dòng)物遺骸，鼠疫專業(yè)人員會(huì)盡一切努力分離鼠疫菌，并保存鼠疫菌種，分離鼠疫菌的基礎(chǔ)是選擇適合的培養(yǎng)基并能快速挑選目的菌。傳統(tǒng)分離鼠疫基礎(chǔ)培養(yǎng)基是赫氏培養(yǎng)基，鼠疫菌在赫氏培養(yǎng)基上通過低倍顯微鏡能見灰白色小菌落，鏡下可見菌落中心隆起、表面有黃褐色粗糙顆粒，邊緣不整齊呈薄而透明的花邊狀，為典型鼠疫菌成熟菌落形態(tài)，這需要專業(yè)人員憑豐富的經(jīng)驗(yàn)、扎實(shí)的專業(yè)知識(shí)來辨別鼠疫菌并根據(jù)鼠疫菌噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)來確定鼠疫菌。但在實(shí)際工作中，由于鼠疫菌在不同因素影響下其形態(tài)表現(xiàn)為多樣性;自然界存在不被噬菌體裂解的鼠疫菌，因此僅從菌落形態(tài)及噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)進(jìn)行判斷易漏診。本研究是結(jié)合鼠疫菌特異性酶的特征，在赫氏消化液基礎(chǔ)上研制鼠疫菌選擇敏感培養(yǎng)基，這其中，赫氏消化液用于增菌，1號(hào)培養(yǎng)基含0.5%膽鹽，具有高度特異性，含有甘露醇同時(shí)具有鑒別作用。
通過對(duì)3種選擇培養(yǎng)基敏感性和特異性檢測(cè)，可以看出3種選擇培養(yǎng)基中，龍膽紫培養(yǎng)基和1號(hào)培養(yǎng)基對(duì)鼠疫菌的生長(zhǎng)和選擇能達(dá)到基本檢出的要求，1號(hào)培養(yǎng)基可以檢出10－1個(gè)菌/m L，敏感性高于龍膽紫培養(yǎng)基，與基礎(chǔ)培養(yǎng)基無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值和統(tǒng)計(jì)方法)。鼠疫菌株在1號(hào)培養(yǎng)基經(jīng)28℃培養(yǎng)24 h即可生長(zhǎng)發(fā)育成熟，菌落呈玫紅色，具備鼠疫菌典型結(jié)構(gòu)(菌落花邊大，中央顆粒粗糙)，變形桿菌、大腸埃希氏菌及革蘭氏陽性桿菌生長(zhǎng)均受抑制，結(jié)果顯示該培養(yǎng)基特異性好。龍膽紫培養(yǎng)基是分離鼠疫菌常用選擇性培養(yǎng)基，可以抑制變形桿菌和革蘭氏陽性菌，但大腸埃希氏菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，并且抑制鼠疫菌的正常生長(zhǎng)，據(jù)此龍膽紫選擇培養(yǎng)基在野外污染嚴(yán)重材料的鼠疫菌培養(yǎng)中應(yīng)用不理想，只適于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物感染試驗(yàn)或污染不嚴(yán)重時(shí)鼠疫菌的分離，例如在鼠疫菌的毒力測(cè)定等實(shí)驗(yàn)，鼠疫菌在2號(hào)培養(yǎng)基生長(zhǎng)發(fā)育差，菌落呈灰白色，與其它雜菌不易區(qū)分，不適于鼠疫菌分離培養(yǎng)。
3種選擇培養(yǎng)基應(yīng)用于動(dòng)物疫情的檢測(cè)，1號(hào)培養(yǎng)基與龍膽紫培養(yǎng)基的檢出結(jié)果符合率為100%。由于野外動(dòng)物材料腐敗，其中01和04旱獺只剩股骨殘骸，對(duì)照培養(yǎng)基各臟器變形桿菌彌漫性生長(zhǎng)，覆蓋少許鼠疫菌，導(dǎo)致分離困難，應(yīng)用1號(hào)選擇培養(yǎng)可抑制變形桿菌彌漫性生長(zhǎng)，玫紅色鼠疫菌生長(zhǎng)良好，極易挑選。龍膽紫培養(yǎng)基上鼠疫菌亦可檢出，但生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)24～48 h依然為初級(jí)菌落。狗臟器培養(yǎng)顯示攜帶噬菌體合并雜菌污染，赫氏培養(yǎng)基上無法挑選鼠疫菌，通常需應(yīng)用抗噬菌體血清培養(yǎng)基分離鼠疫菌，但在野外無法制備，本研究應(yīng)用1號(hào)選擇敏感培養(yǎng)基，鼠疫菌24 h發(fā)育成熟，菌落呈玫紅色，結(jié)構(gòu)典型，能抑制雜菌生長(zhǎng)，鼠疫菌易于挑選，不足之處在于鼠疫菌分離后依然攜帶噬菌體，所以分離后需在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行抗噬菌體血清培養(yǎng)基進(jìn)一步分離培養(yǎng)后菌株方能保存。實(shí)際檢測(cè)可看出1號(hào)培養(yǎng)基效果優(yōu)于龍膽紫培養(yǎng)基。
01號(hào)培養(yǎng)基是筆者自主研發(fā)的顯色培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是利用顯色培養(yǎng)基的原理，使用中性紅為顯色底物，在鼠疫菌特異性酶作用下酵解甘露醇產(chǎn)酸，中性紅指示劑在酸性環(huán)境中產(chǎn)生紅色集團(tuán)附著于菌落上，使鼠疫菌菌落顯示紅色，同時(shí)添加抑制變形桿菌和革蘭氏陽性菌的試劑，十二烷基硫酸鈉，紅霉素，膽鹽3號(hào)，阿莫西林，對(duì)變形桿菌、大腸桿菌和革蘭氏陽性菌抑制作用強(qiáng)，適用于檢驗(yàn)腐敗和雜菌污染的動(dòng)物材料，而且生長(zhǎng)的鼠疫菌菌落典型，易于挑選，在野外材料鼠疫菌分離有實(shí)際意義，使用該培養(yǎng)基應(yīng)注意耶爾森氏菌屬中與鼠疫菌近源的假結(jié)核桿菌、小腸結(jié)腸炎菌都具有能發(fā)酵甘露醇的特異性酶，在實(shí)際應(yīng)用中分離疑似菌后應(yīng)做噬菌體裂解實(shí)驗(yàn)和鼠疫核酸檢測(cè)以確證。
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