茯磚茶中金花菌菌落標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)方法優(yōu)化條件【試驗(yàn)】（一）
茯磚茶內(nèi)部或表面存在大量金黃色顆粒狀物質(zhì)，俗稱“金花”；其數(shù)量的多少是判斷茯磚茶品質(zhì)好壞的重要指標(biāo)。由于地域的差異性，金花菌具有多樣性，但大都以冠突散囊菌為主，還包括謝瓦式散囊菌、阿姆斯特丹散囊菌、間型散囊菌及肋狀散囊菌等。其子囊果均為閉囊殼型，他們的共同特征是：培養(yǎng)前期（5 d～6 d），菌落質(zhì)地緊密，中心顏色為黃色或棕褐色，周邊為淺黃色。目前，對(duì)金花菌的檢測(cè)一般均采用GB/T 4789.15-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》，該方法針對(duì)的是食品中霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)，而金花菌閉囊殼很難破裂，形成的菌落可能是2個(gè)～3個(gè)或更多個(gè)孢子生長(zhǎng)發(fā)育而成，因此采用國(guó)標(biāo)方法并不能準(zhǔn)確地反映茯磚茶中金花菌的數(shù)量。
本試驗(yàn)通過(guò)響應(yīng)面法建立多元二次回歸方程來(lái)擬合因素與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，充分考慮各因素之間的影響，通過(guò)前處理?xiàng)l件使金花菌閉囊殼充分破裂釋放子囊孢子，從而得到金花菌菌落總數(shù)計(jì)數(shù)的優(yōu)化條件，為以后建立茯磚茶中金花菌標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)方法提供試驗(yàn)依據(jù)。
1材料與方法
1.1材料與設(shè)備
原料：茯磚茶，由咸陽(yáng)涇渭茯茶有限公司提供。
FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：天津泰斯特儀器有限公司；LDZX-50KBS立式壓力蒸氣滅菌鍋：上海申安醫(yī)療器械有限公司；SW-CJ-ID單人單面凈化工作臺(tái)：上海樹立儀器儀表有限公司；GHP-90隔水式恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；HZQ-C雙層空氣浴振蕩器：哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司。
培養(yǎng)基：孟加拉紅培養(yǎng)基，按GB/T 4789.15-2016配制。
1.2方法
1.2.1樣品的準(zhǔn)備
采用GB/T 8302-2013《茶取樣》方法取樣。將整塊茶磚撬碎混勻，取部分混勻茶樣粉碎后備用，部分不粉碎茶樣作為對(duì)照樣品。
1.2.2菌落計(jì)數(shù)方法
采用GB/T 4789.15-2016方法。取已準(zhǔn)備好的茶樣25.00 g于裝有無(wú)菌稀釋液的三角瓶中（內(nèi)含200顆玻璃珠），經(jīng)振搖后進(jìn)行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，平板于（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計(jì)數(shù)并拍照記錄。
1.2.3單因素試驗(yàn)
1.2.3.1篩子目數(shù)對(duì)金花菌菌落總數(shù)的影響
茶樣粉碎，分別過(guò)篩40、50、60、70、80、90目，分別稱取過(guò)篩后的茶樣25.00 g于無(wú)菌蒸餾水中，振搖30 min（200 r/min）后進(jìn)行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計(jì)數(shù)。
1.2.3.2無(wú)菌稀釋液濃度對(duì)金花菌菌落總數(shù)的影響
稱取過(guò)篩60目的茶樣25.00 g，分別加入無(wú)菌的蒸餾水、0.45%NaCl、0.85%NaCl、1.25%NaCl、1.65%NaCl、磷酸緩沖溶液中稀釋，振搖30 min（200 r/min）后進(jìn)行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計(jì)數(shù)。
1.2.3.3振搖時(shí)間對(duì)金花菌菌落總數(shù)的影響
稱取過(guò)篩60目的茶樣25.00 g于無(wú)菌蒸餾水中，在轉(zhuǎn)速為200 r/min條件下，分別振搖20、30、40、50、60、70 min后，進(jìn)行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計(jì)數(shù)。
1.2.4響應(yīng)面試驗(yàn)
在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以篩子目數(shù)、NaCl濃度、振搖時(shí)間為自變量，以金花菌菌落總數(shù)為響應(yīng)值進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)，中心試驗(yàn)重復(fù)5次，共17個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1所示。
表1因素水平表
2結(jié)果與分析
2.1單因素試驗(yàn)結(jié)果
2.1.1篩子目數(shù)對(duì)金花菌菌落總數(shù)的影響
篩子目數(shù)對(duì)金花菌菌落總數(shù)的影響見圖1。
圖1篩子目數(shù)對(duì)金花菌菌落總數(shù)的影響
由圖1可知，篩子目數(shù)對(duì)金花菌菌落總數(shù)影響顯著。隨著篩子目數(shù)的減小，金花菌菌落總數(shù)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，篩子目數(shù)從40目至80目，金花菌菌落總數(shù)呈直線增長(zhǎng)，篩子目數(shù)為80目時(shí)，其菌落總數(shù)為（45.8±1.5）×105CFU/g；80目至90目，金花菌菌落總數(shù)趨于平緩，原因可能是高速粉碎機(jī)在粉碎過(guò)程中高速撞擊并產(chǎn)生熱量，當(dāng)粉碎時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)容易導(dǎo)致金花菌孢子結(jié)構(gòu)被破壞而失活。因此，篩子目數(shù)選用80目。
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