Biosense微生物動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)實驗操作步驟——膿腫分枝桿菌的生長曲線
膿腫分枝桿菌是快速生長分枝桿菌(RGM)中最耐藥的細(xì)菌之一。它對目前使用的抗生素(包括幾乎所有抗結(jié)核藥物)具有天然耐藥性，這嚴(yán)重復(fù)雜化并限制了治療方案。膿腫分枝桿菌被認(rèn)為是囊性纖維化患者的重要病原體。細(xì)菌素可能是對抗這種感染的替代治療方案，以克服細(xì)菌耐藥性的問題。與經(jīng)典的肉湯稀釋法相比，oCelloScope具有速度快的優(yōu)點。它可以提供圖像和視頻，并且可以快速篩選抗菌藥物的活性。研究人員可以在6小時內(nèi)檢測到膿腫分枝桿菌的生長，而不是傳統(tǒng)的在肉湯培養(yǎng)基中連續(xù)稀釋3-5天。
實驗方法
1、將oCelloScope置于37°C的標(biāo)準(zhǔn)實驗室培養(yǎng)箱中
2、在37°C的7H10瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)膿瘍桿菌參考株或臨床分離株3-5天
3、根據(jù)OD600測量值，將McFarland細(xì)菌懸浮液配制為0.5。將懸液稀釋1/10到7H9培養(yǎng)基中(添加0.5%甘油和10%OADC)。
4、將細(xì)菌懸液添加到含有細(xì)菌素的96孔板中
5、將裝有細(xì)菌懸浮液的96孔板導(dǎo)入oCelloScope設(shè)備中，擰緊并關(guān)閉儀器蓋。建議添加到每個孔的菌懸液的總?cè)莘e為200μL。
6、使用oCelloScope的生長動力學(xué)模塊進(jìn)行AST分析。
7、通過單擊主窗口左上角的“New job”按鈕，配置UniExplorer軟件進(jìn)行延時分析。
8、為新作業(yè)命名，然后按以下順序雙擊(或拖動)圖標(biāo)，從左側(cè)列表中選擇采集模塊:(i)“采集”(用于記錄新圖像數(shù)據(jù))和(ii)“生長動力學(xué)分析”(用于監(jiān)測細(xì)菌生長/生長抑制的時間)。按“下一個”。
9、通過左鍵單擊從儀器列表中選擇要使用的儀器，讓UniExplorer軟件識別oCelloScope儀器。按“Next”繼續(xù)實驗設(shè)置。
10、選擇96孔板
11、通過選擇獲取的圖像數(shù)量(“重復(fù)次數(shù)”)和兩個連續(xù)圖像之間的時間間隔(“重復(fù)間隔”)來調(diào)整分析時間。例如，通過選擇“重復(fù)次數(shù)”=48和“重復(fù)間隔時間”=00:30:00,oCelloScope將在24小時內(nèi)每30分鐘拍攝一次圖像，第一張圖像在t=0時拍攝。
12、用光標(biāo)選擇并啟用應(yīng)該包含在分析中的孔。啟用的孔顯示為藍(lán)色。
13、按“開始”鍵開始實驗
14、實時生長/生長抑制曲線以及圖像數(shù)據(jù)和延時視頻可以在“當(dāng)前掃描”選項卡中檢查和比較實驗期間。
圖1.Biosense微生物動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)
實驗結(jié)果
詳細(xì)介紹了使用Biosense微生物動監(jiān)測系統(tǒng)在醫(yī)院環(huán)境中測試，由初創(chuàng)公司Syngulon(http://syngulon.be)提供的對膿腫分枝桿菌的細(xì)菌素和抗菌肽的抗菌活性，并實時監(jiān)測生長動力學(xué)分析的方案。
圖2、采用Biosense微生物動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)中的BCA歸一化算法測量膿腫分枝桿菌生長曲線(三份)
圖3、Biosense微生物動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)捕獲的7h30分鐘時刻對應(yīng)的膿腫分枝桿菌(粗略表型)生長延時圖(典型蛇形索成像)
圖4、Biosense微生物動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)測試的膿腫分枝桿菌生長曲線
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